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在生物活體內(nèi)，生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護(hù)細(xì)胞或組織，但是在體外培養(yǎng)時(shí)，沒有任何保護(hù)自己的免疫屏障。對(duì)于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2 和濕度，大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實(shí)驗(yàn)的需要。然而，針對(duì)培養(yǎng)過(guò)程中面臨的各種污染源，各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同，因此細(xì)胞體外培養(yǎng)中較為大的威脅實(shí)際上是污染問(wèn)題。  

二氧化碳培養(yǎng)箱里的主要污染源：真菌（霉菌和酵母菌）、細(xì)菌、病毒、支原體、非同種細(xì)胞。 對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō)，非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存，培養(yǎng)箱本身是不會(huì)辨別的，而細(xì)胞培養(yǎng)中大部分時(shí)間里細(xì)胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi)，因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵！  

1、真菌（霉菌和酵母菌）：真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了；目前沒有好的抑制方法，包括現(xiàn)在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復(fù)爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。  

2、細(xì)菌：細(xì)菌污染后，培養(yǎng)基1-2天就會(huì)變色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯，應(yīng)迅速將污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和*凈臺(tái)。 

3、病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細(xì)胞隔離，丟棄處理，相對(duì)來(lái)說(shuō)容易處理，對(duì)操作者威脅較大；盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。 
       

4、支原體：支原體污染后，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細(xì)胞無(wú)明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實(shí)則細(xì)胞已經(jīng)受到多方面潛在影響，如引起細(xì)胞變形，影響DNA合成，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等，往往被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)者忽視。  

5、非同種細(xì)胞：即細(xì)胞交叉污染，由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前，普遍上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。 

因此，以上污染一旦發(fā)生，細(xì)胞較為后基本只能丟棄，實(shí)驗(yàn)無(wú)法挽救，對(duì)于許多取樣困難的實(shí)驗(yàn)損失無(wú)法估量！  

目前，二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌技術(shù)主要有干熱、濕熱、紫外燈照射、消毒劑擦拭等。  

高溫干熱空氣滅菌是目前普遍*的較為有效的滅菌技術(shù)，能*消滅所有微生物污染源（包括耐高溫的芽孢桿菌）；濕熱滅菌通常用于高壓蒸汽滅菌中，比較少用在CO2培養(yǎng)箱上，濕熱滅菌在常壓下又叫煮沸法，煮沸的水溫一般至少需為100℃，細(xì)菌繁殖體煮沸5分鐘被殺死，但芽胞常需煮沸2小時(shí)以上才可被殺死；紫外燈照射法的有效性受很多因素影響，如遮擋、時(shí)間、強(qiáng)度、照射距離，濕度等，滅菌效果很難保證；消毒劑擦拭法是對(duì)表面滅菌的方法，適合于平整的表面如實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，而箱體內(nèi)部設(shè)計(jì)的死角、各種器件因無(wú)法擦拭等因素導(dǎo)致滅菌效果也很有限，而且含氯、碘的消毒劑對(duì)于不銹鋼有腐蝕作用，不能對(duì)不銹鋼箱體進(jìn)行擦拭滅菌

 
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